Cas9首先与crRNA和tracrRNA结合形成复合物,然后通过PAM序列与DNA结合并侵入DNA,形成RNA-DNA复合物结构,然后切割靶DNA双链使DNA双链断裂,从而达到基因敲除的效果。
![基因敲除原理是(基因敲除原理和应用)](http://www.lgsc188.com/zb_users/cache/ly_autoimg/b/b70188491798e86129a57180426213ff.jpg)
通过基因工程手段,对crRNA和tracrRNA进行改造并连接在一起,获得sgRNA(单引导RNA)。融合RNA具有与野生型RNA相似的活性,但由于其结构简化,更便于研究人员广泛使用。通过将最初表达的sgRNA与最初表达的Cas9连接起来,可以获得可以同时表达它们两者的质粒,并且可以通过将其转染到细胞中来操纵靶基因。
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